EGFR（Epidermal Growth Factor Receptor）是上皮生長因子（EGF）細胞增殖和信號 傳導(dǎo)的受體，EGFR 是一種糖蛋白，屬于酪氨酸激酶型受體，位于細胞膜表面，靠與配體 結(jié)合來激活。EGFR 與腫瘤細胞的增殖、血管生成、腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移及細胞凋亡的抑制有 關(guān)。EGFR 基因突變是預(yù)測 NSCLC 患者使用 EGFR-TKIs 療效的重要靶標。

      EGFR 酪氨酸激酶區(qū)域的突變主要發(fā)生在 18-21 外顯子，其中 19 號和 21 號外顯子突 變覆蓋突變的 90%。EGFR 突變主要包括 4 種類型：外顯子 19 缺失突變、外顯子 21 點突 變、外顯子 18 點突變和外顯子 20 插入突變。最常見的 EGFR 突變?yōu)橥怙@子 19 缺失突變 和外顯子 21 點突變，二者均會導(dǎo)致酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域活化。EGFR 基因突變可以分為兩大 類，一個是藥物敏感突變，也就是突變后可以使用某種靶向藥物（如 19 缺失，L858R 突 變），另一個是耐藥突變，即突變后對某種靶向藥物耐藥（如 T790M 突變）。

      BaF3（小鼠原 B 細胞）的生長和增殖需要 IL-3 的維持。通過引入各種表達激酶的基因， 能作為 BaF3 的驅(qū)動基因，讓 BaF3 不再依賴 IL-3 而增殖，進而激酶基因成為 BaF3 增殖依 賴的驅(qū)動基因，用于評估小分子藥物對激酶的靶向抑制作用，原理及流程見下圖所示。
 

Figure 1. EGFR[Del19-T790M-C797S] BaF3 細胞的構(gòu)建原理圖

1. WB of EGFR Del19/T790M/C797S expression

Lane 1: Negative control
Lane 2: EGFR-Del19/T790M/C797S

Figure 2. WB of EGFR Expression
 

2.Sanger sequencing

Figure 3. EGFR Del19-T790M-C797S/BaF3  Del19

Figure 4. EGFR Del19-T790M-C797S/BaF3  T790M-C797S
 

3. Anti-proliferation assay

Figure 5. Recombinant EGFR Del19-T790M-C797S/BaF3 stably expressing EGFR.
 

Figure 6. CTG Proliferation Assay of EGFR [DEL19-T790M] C797S BaF3 (C2).